盡管關(guān)于病毒性肝炎的發(fā)病機(jī)理目前還有許多方面是未知的，但一些研究已經(jīng)明確告訴我們，病毒在進(jìn)入肝細(xì)胞后會影響肝細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)。要想從基因?qū)用鎸ふ也⒌玫侥切┡c肝炎病毒相關(guān)的基因，基因克隆化是一種有效的途徑。在日前北京地壇醫(yī)院舉辦的全國首屆感染病學(xué)術(shù)會議上，該院成軍教授和同行交流了通過基因克隆化對肝炎進(jìn)行的一些研究。

病毒嗜肝特性從何而來

在人體的很多細(xì)胞中都能檢測到肝炎病毒，惟獨(dú)肝細(xì)胞此時顯得很脆弱，為什么會產(chǎn)生這種嗜肝特性呢?

大量研究資料表明肝細(xì)胞中的大分子環(huán)境，更加適合肝炎病毒的復(fù)制和表達(dá)，這些因素不是別的，就是肝細(xì)胞中特殊的蛋白質(zhì)成分。

換句話說，病毒基因的復(fù)制和表達(dá)受到肝細(xì)胞中蛋白質(zhì)因子的調(diào)節(jié)。要找到這些能影響病毒基因的蛋白質(zhì)因子，可以有很多基因克隆化方法，其中酵母單雜交技術(shù)一方面可以克隆基因，而后還能用于研究被克隆基因的功能，因此具有重要應(yīng)用前景。成教授等曾利用酵母單雜交技術(shù)篩選SP1(一種乙肝病毒基因啟動子)的結(jié)合蛋白，發(fā)現(xiàn)了一種由92個氨基酸殘基(aa)組成的新蛋白，命名為SP1啟動子的結(jié)合蛋白1(SBP1)，后證實(shí)SBP1對于SPI啟動子的轉(zhuǎn)錄活性具有顯著的抑制作用，是SPI啟動子的一種負(fù)調(diào)節(jié)因子。從而為研究SPI啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，開辟了新的研究方向。

病毒怎么影響肝細(xì)胞

肝炎病毒蛋白在肝細(xì)胞中不是孤立存在的，肝炎病毒感染肝細(xì)胞之后，改變了細(xì)胞正常的分裂、增殖、凋亡的信號傳導(dǎo)途徑，這就是肝炎病毒引起各種類型慢性肝臟疾病的重要機(jī)制所在。如果肝炎病毒蛋白結(jié)合的蛋白屬于一種蛋白酶，那么就可能改變這種蛋白酶的活性;如果肝炎病毒蛋白結(jié)合的蛋白屬于一種底物，那么就會改變作為底物的性質(zhì)。所以，從研究肝炎病毒蛋白結(jié)合蛋白的方面入手，是闡明其致病機(jī)理的重要突破口。

在研究肝炎病毒蛋白結(jié)合蛋白的多種技術(shù)中，酵母雙雜交技術(shù)經(jīng)過這幾年的改進(jìn)，效率顯著提高，假陽性率進(jìn)一步降低，成為后基因組計劃中重要的技術(shù)平臺。

成教授等應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)對于HBV、HCV肝炎病毒蛋白結(jié)合蛋白進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)肝炎病毒蛋白結(jié)合蛋白的種類非常多。其中既有已知功能蛋白基因，也有未知功能蛋白基因。例如，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)HCV核心蛋白與載脂蛋白AI(APO-AI)和載脂蛋白AII(APO-AII)結(jié)合。根據(jù)這一結(jié)果，結(jié)合臨床上見到慢性丙型肝炎患者肝臟活檢組織的基本病理表現(xiàn)是肝脂肪變，因此考慮慢性丙型肝炎肝臟脂肪變的基本分子生物學(xué)機(jī)制很可能就是HCV核心蛋白與APO-AI、APO-AII之間的結(jié)合，干擾了肝細(xì)胞中正常的脂類代謝。

另外，經(jīng)過研究還發(fā)現(xiàn)了一種新蛋白可以與HBV的前-S1蛋白結(jié)合，稱為HBV前-S1蛋白結(jié)合蛋白(PreS1BP)。需要指出的是，這里的基因克隆化已不再是簡單地對基因進(jìn)行結(jié)構(gòu)和序列的克隆，而發(fā)展

到從功能角度入手，找到與已知基因有相互作用的基因序列，然后再進(jìn)行針對性的研究，即功能性克隆策略。通過這種功能性克隆策略，提示這種編碼基因?qū)嶋H存在的可能性，而且至少提示這種蛋白與HBV的前-S1蛋白能夠結(jié)合。HBV、HCV結(jié)合蛋白篩選的成功，拓寬了噬菌體表面展示技術(shù)的應(yīng)用范圍，為研究蛋白-蛋白相互作用提供了一個高效的研究途徑。

如何找到反式激活靶基因

反式激活是指特殊蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞后，可通過信號傳導(dǎo)促進(jìn)或改變其他基因的表達(dá)。肝炎病毒蛋白對于肝細(xì)胞基因組表達(dá)的反式激活作用早已被人們廣泛認(rèn)識，是與肝炎發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的重要分子生物學(xué)機(jī)制。

分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，為研究和克隆肝炎病毒蛋白反式激活基因提供了前所未有的機(jī)遇。抑制性消減雜交技術(shù)是目前較為成熟的克隆與發(fā)現(xiàn)反式激活新基因的不可替代的技術(shù)途徑，它不僅可以篩選得到功能已知的基因，還能篩選到功能未知的基因。因此，抑制性消減雜交技術(shù)在相當(dāng)一段時間內(nèi)具有廣泛的應(yīng)用前景。